透明质酸

1.

将鸡冠碎片加入到丙酮中，浸泡过夜至鸡冠脱水变硬。然后置于瓷盘中进行干燥，干燥后经粉碎机粉碎成粉状。将鸡冠粉倒入搪瓷罐中，加入6～7倍蒸馏水，搅拌均匀，浸泡24h以上，使鸡冠粉充分溶胀，然后过滤，收集滤液，滤渣再按同样方法浸泡3次，合并3次过滤液。再将滤液倒入陶瓷缸中，搅拌下加入10%的固体氯化钠，并加入等体积的氯仿，搅拌3h后，分出水相。向分出的水相中加入2倍体积的95%乙醇，搅拌均匀，静置过夜，沉淀出透明质酸，然后滤干沉淀物，干燥后得粗品。粗品再溶于4倍体积的01mol/L氯化钠溶液中，用稀盐酸调节pH=45～5，再加入等体积的氯仿，静置分层后，吸出上层水相。水相用8%氢氧化钠溶液调节pH=75，加入链酶蛋白酶，37℃下保温24h。再用等体积的氯仿萃取处理2次，合并上层水相，下层液体回收氯仿。水相中加入等体积的1%氯化十六烷基吡啶溶液，搅拌均匀，静置沉淀，过滤，收集沉淀。沉淀再用2～3倍体积的04mol/L氯化钠溶解，过滤，滤液中再加入3倍体积95%乙醇，静置沉淀，吸去上层乙醇，下层再用95%乙醇反复沉淀2次，下层沉淀物吊滤，干燥，再用丙酮洗涤2次，真空干燥，可得成品。

2.微生物（兽疫链球菌HA产生菌变异株Y921）发酵法。