R406

6-[[5-氟-2-[(3,4,5-三甲氧基苯基)氨基]-4-嘧啶基]氨基]-2,2-二甲基-2H-吡啶并[3,2-b]-1,4-恶嗪-3(4H)-酮苯磺酸盐

benzenesulfonic acid,6-[[5-fluoro-2-(3,4,5-trimethoxyanilino)pyrimidin-4-yl]amino]-2,2-dimethyl-4H-pyrido[3,2-b][1,4]oxazin-3-one

R406 是一种ATP竞争性的 Syk 抑制剂，Ki 为 30 nM，有效抑制 Syk 激酶活性，IC50 为 41 nM。

信号通路 >> 蛋白酪氨酸激酶 >> SYK

Ki: 30 nM (Syk)[1] IC50: 41 nM (Syk)[1]

R406还对腺苷A3受体具有拮抗活性，IC50估计为93 nM [1]。在Ramos B淋巴瘤细胞中，B细胞受体（BCR）交联诱导B细胞接头蛋白（BLNK）的强烈磷酸化，其通过添加Syk抑制剂R406而消除。另外，R406显着减少源自移植后淋巴组织增生性疾病（PTLD）患者的EBV +细胞系中的组成型Syk信号传导，称为SLCL。因此，R406抑制Syk活化[2]。

与载体对照相比，在免疫复合物攻击前1小时施用R406对小鼠进行预防性治疗，使皮肤反向被动Arthus反应分别在1和5mg / kg下降低约72％和86％。用R406处理1或5mg / kg R406后提取的外渗染料的净光密度读数分别从0.14（载体）降至0.04或0.02（p <0.01）[1]。

进行荧光偏振反应。对于Kidetermination，在DMSO或R406存在下，在125,62.5,31.25,15.5或7.8nM下，在200μM（2倍连续稀释）的8种不同ATP浓度下建立重复的200μL反应。在不同的时间点，取出20μL的每个反应并淬灭以停止反应。对于每种浓度的R406，测定每种ATP浓度下的反应速率并相对于ATP浓度作图，以确定表观Km和Vmax（最大速率）。最后，将表观Km（或表观Km / Vmax）相对于抑制剂浓度作图，以确定Ki。使用Prism和Prism酶动力学程序进行所有数据分析[1]

将细胞（0.5-1×10 6个细胞/ mL）接种于小分子抑制剂R406，LY294002或PD98059（0-10μM）或等量载体（DMSO，0-1：1000）的系列稀释液中。在37℃培养总共96小时48小时后补充药物和培养基。使用碘化丙啶进行细胞周期分析。使用膜联蛋白V增强的GFP（EGFP）凋亡检测试剂盒测定凋亡细胞的百分比。在FACScan流式细胞仪上分析数据[2]。

小鼠[1]用含有1％伊文思蓝染料的盐水（10mg / kg）中的1％卵清蛋白（OVA）静脉内攻击小鼠。 10分钟后，用异氟烷麻醉小鼠并在背外侧剃毛。将兔抗OVA IgG（50μg/25μL）皮内注射到背部的左侧三个相邻位置。在相同动物的相对侧上三次注射兔多克隆IgG（50μg/25μL）作为对照。在抗体/抗原攻击前60分钟向动物施用R406（1和5mg / kg）或载体（67％PEG 400）。攻击后4小时，对动物实施安乐死，并通过测量染料外渗到周围组织中来评估皮肤组织的水肿和炎症。将注射部位的打孔活组织检查（8mm）在2mL甲酰胺中于80℃温育过夜。在OD610下通过分光光度法测量外渗伊文思蓝染料的浓度。

[1]. Braselmann S, et al. R406, an orally available spleen tyrosine kinase inhibitor blocks fc receptor signaling and reduces immune complex-mediated inflammation. J Pharmacol Exp Ther, 2006, 319(3), 998-1008. [2]. Hatton O, et al. Syk-induced phosphatidylinositol-3-kinase activation in Epstein-Barr virus posttransplant lymphoproliferative disorder. Am J Transplant. 2013 Apr;13(4):883-90. [3]. Kitai M, et al. Effects of a spleen tyrosine kinase inhibitor on progression of the lupus nephritis in mice. J Pharmacol Sci. 2017 May;134(1):29-36.

C₂₈H₂₉FN₆O₈S

628.629

628.175171

198.22000

5.22730