特拉匹韦

特拉匹韦

telaprevir

Telaprevir 是一种有效的选择性的可逆 HCV NS3-4A protease 抑制剂，作用于基因 1型 (H株) NS3 蛋白酶结构域和 NS4A 辅因子肽，Ki 为 7 nM。

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Ki: 7 nM (genotype 1 HCV NS3-4A protease)[1]

Telaprevir（VX-950）是一种共价，可逆的NS3-4A蛋白酶抑制剂，具有缓慢结合和慢解离机制。 Telaprevir在酶抑制中表现出显着不同的动力学，其最明显的例子是结合的酶 - 抑制剂复合物的非常长的半衰期（58分钟）。 Telaprevir与IFN-α在抑制HCV复制和抑制复制子细胞中抗性的出现方面具有中度协同作用。 Telaprevir以时间和剂量依赖性方式降低HCV RNA水平。与Telaprevir孵育24,48,72和120小时后的IC50分别确定为0.574,0.488,0.21和0.139μM，表明抑制效应随时间增加。在2％FBS存在下使用48小时孵育进行三次独立实验后，Telaprevir的平均IC50确定为0.354±0.035μM，平均IC90为0.830±0.190μM[1]。 Telaprevir（VX-950）是丙型肝炎病毒（HCV）NS3-4A丝氨酸蛋白酶的有效选择性肽模拟抑制剂，Telaprevir在基因型1b HCV复制子细胞（IC50 = 354 nM）和人体中均表现出优异的抗病毒活性。胎儿肝细胞感染基因型1a HCV阳性患者血清（IC50 = 280 nM）[2]。

以10或25 mg / kg给予Telaprevir（VX-950）的小鼠血清SEAP活性降低约5倍，其平均值（±SEM）为18.7±8.3％或18.4±5.4％分别与给药载体（100±28％）进行比较。这些数据表明Telaprevir能够抑制小鼠肝脏中的HCV NS3-4A丝氨酸蛋白酶活性，并阻断这些小鼠的切割和随后SEAP分泌到血液循环中[2]。

进行HCV复制子细胞中Telaprevir（VX-950）或IFN-α的IC50，IC90，CC50的测定。简言之，将每孔1×104个复制子细胞接种在96孔板中。第二天，将复制子细胞在37℃下孵育指定的时间，用抗病毒剂在DMEM加2％FBS和0.5％DMSO中连续稀释。使用RNeasy-96试剂盒提取总细胞RNA，并使用定量RT-PCR（QRT-PCR）测定法测定HCV RNA的拷贝数。每个基准点代表细胞培养中五次重复的平均值。使用基于四唑（MTS）的细胞活力测定，在相同的实验设置下测量Telaprevir的细胞毒性。对于用人肝细胞系的细胞毒性测定，使用每孔1×104个亲本Huh-7细胞或每孔4×104个HepG2细胞。为了确定Telaprevir对静息PBMC的细胞毒性，将每孔1×10 5个细胞与Telaprevir在RPMI-1640培养基（无血清）中孵育48小时，并通过基于MTS的测定确定细胞活力。为了确定VX-950对增殖的PBMC的细胞毒性，将RPMI-1640培养基中每孔1×10 5个细胞加入到96孔板中，该板用抗人CD3抗体预涂覆。将细胞与Telaprevir和抗人CD28抗体在37℃温育72小时，并在第48和72小时之间通过[3H]胸苷更新确定细胞生长[1]。

小鼠[2]通过尾静脉向5只6周龄SCID小鼠（每组6只动物）注射109只IFU /小鼠重组腺病毒Ad-WT-HCVpro-SEAP。每组小鼠口服给予以下剂量之一的Telaprevir（VX-950）：10,25,75,150或300mg / kg。第一次Telaprevir剂量在腺病毒注射前2小时给予，第二剂量在注射后10小时给予。另外一组10只小鼠单独给予载体。在注射后24小时收集血清样品，并将每个Telaprevir给药组中的SEAP活性与载体组的SEAP活性进行比较。大鼠和狗[2]在大鼠和狗中评估Telaprevir（VX-950）的静脉内和口服药代动力学。给予一组体重为250-300g的3只雄性Sprague-Dawley大鼠静脉推注剂量为0.95mg / kg的Telaprevir。在给药前和给药后0.083,0.167,0.25,0.5,1,1.5,2,3,4,6和8小时，将系列血液样品收集在肝素化管中。给一组3只雄性比格犬（8至12kg）静脉推注剂量为3.5mg / kg Telaprevir的10％乙醇，40％聚乙二醇400和50％D5W。在给药前和给药后0.083,0.167,0.25,0.5,1,1.5,2,4,6,8,12和24小时，将系列血液样品收集在肝素化管中。对于大鼠和狗的口服研究，Telaprevir配制成聚乙烯吡咯烷酮（PVP）K-30加2％十二烷基硫酸钠，然后以口服强饲法给药。一组3只雄性Sprague-Dawley大鼠（250至300g）口服给予40mg / kg VX-950，并且给予一组4只雄性比格犬（10.9至12.0kg）口服剂量9.6mg / kg VX-950。在两次口服研究中，在给药前和给药后0.25,0.5,1,1.5,2,3,4,6,8,12和24小时取血样。在静脉内和口服研究中，通过离心获得血浆样品并储存在-70℃直至分析。通过手性液相色谱然后串联质谱（LC / MS / MS）方法分析来自静脉内研究的样品，并使用非手性LC / MS / MS方法分析来自口服研究的样品。

[1]. Lin K, et al. VX-950, a novel hepatitis C virus (HCV) NS3-4A protease inhibitor, exhibits potent antiviral activities in HCv replicon cells. Antimicrob Agents Chemother. 2006 May;50(5):1813-22. [2]. Perni RB, et al. Preclinical profile of VX-950, a potent, selective, and orally bioavailable inhibitor of hepatitis C virus NS3-4A serine protease. Antimicrob Agents Chemother. 2006 Mar;50(3):899-909. [3]. Zhang X, et al. Discovery and evolution of aloperine derivatives as a new family of HCV inhibitors with novel mechanism. Eur J Med Chem. 2018 Jan 1;143:1053-1065.

1.3±0.1 g/cm3

C₃₆H₅₃N₇O₆

679.849

679.405762

179.56000

3.93

1.584

24/25