BKM120(盐酸盐)

BKM120(盐酸盐)

5-(2,6-dimorpholin-4-ylpyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine hydrochloride

NVP-BKM120 Hydrochloride 是一种 pan-class I PI3K 抑制剂，作用于p110α/p110β/p110δ/p110γ，IC50 分别为 52 nM/166 nM/116 nM/262 nM。

研究领域 >> 癌症

p110α:52 nM (IC50)p110α-H1047R:58 nM (IC50)p110α-E545K:99 nM (IC50)p110δ:116 nM (IC50)p110β:166 nM (IC50)p110γ:262 nM (IC50)Vps34:2.4 μM (IC50)mTOR:4.6 μM (IC50)

NVP-BKM120（BKM120）对I类PI3K表现出50-300nM的活性，包括最常见的p110α突变体。此外，NVP-BKM120对III类和IV类PI3K的效力较低，其中分别观察到2,5，> 5和>25μM的生化活性抑制VPS34，mTOR，DNAPK和PI4K [1]。 NVP-BKM120以剂量和时间依赖性方式诱导多发性骨髓瘤（MM）细胞凋亡。浓度≥10μM的NVP-BKM120在24小时时在所有测试的MM细胞系中诱导显着的细胞凋亡（与对照相比，P <0.05）。因此，如果没有另外说明，则在以下实验中选择10μMNVP-BKM120和24小时处理。 NVP-BKM120处理在所有测试的MM细胞系中导致剂量依赖性生长抑制。 NVP-BKM120 IC50在测试的MM细胞中不同。在24小时处理时，ARP-1，ARK和MM.1R的IC50在1和10μM之间，而MM.1S的IC50 <1μM，U266的IC50在10和100μM之间。总之，NVP-BKM120处理以剂量和时间依赖性方式导致MM细胞生长抑制和凋亡[2]。

在A2780异种移植肿瘤中，以3,10,30,60和100mg / kg口服给予NVP-BKM120（BKM120）导致pAKTSer473的剂量依赖性调节。在3和10mg / kg时观察到pAKTSer473的部分抑制，并且在30,60或100mg / kg的剂量下分别观察到接近完全抑制。 pAKT的抑制（标准化为总AKT）跟踪血浆和肿瘤药物暴露[1]。与对照小鼠相比，接受NVP-BKM120（每天每公斤5μM，持续15天）治疗的小鼠具有显着更小的肿瘤负荷，其以肿瘤体积（P <0.05）和循环人κ链的水平测量（P <0.05）。 ）。此外，NVP-BKM120治疗显着延长荷瘤小鼠的存活率（P <0.05）[2]。

将待测试的NVP-BKM120溶解在DMSO中，并以每孔1.25μL直接分配到黑色384孔板中。为了开始反应，在测定缓冲液（10mM Tris pH 7.5,5mM MgCl 2,20mM NaCl，1mM DTT和0.05％CHAPS）中加入25μL10nM PI3激酶和5μg/ mL 1-α-磷脂酰肌醇（PI）在每个孔中加入25μL2μMATP的测定缓冲液。进行反应直至约50％的ATP耗尽，然后通过加入25μL的KinaseGlo溶液终止反应。将停止的反应温育5分钟，然后通过发光检测剩余的ATP [1]。

A2780细胞在补充有10％FBS的DMEM中培养。 L-谷氨酰胺，丙酮酸钠和抗生素。将细胞以每孔1000个细胞的密度接种在相同的培养基中，每孔100μL进入黑壁透明底板并孵育3-5小时。将在DMSO（20mM）中提供的NVP-BKM120进一步稀释到DMSO中（7.5μL的20mM NVP-BKM120在22.5μLDMSO中。充分混合，转移10μL至20μLDMSO，重复直至达到9个浓度）。然后将稀释的NVP-BKM120溶液（2uL）加入细胞培养基（500μL）细胞培养基中。将等体积的该溶液（100μL）加入到96孔板中的细胞中，并在37℃下孵育3天，并使用Cell Titer Glo进行显色。使用Trilux [1]通过发光读数确定细胞增殖的抑制。

小鼠[2]使用6至8周龄的雌性严重联合免疫缺陷（SCID）小鼠。在右侧皮下接种SCID小鼠，将100万个ARP-1或MM.1S细胞悬浮于50μL磷酸盐缓冲盐水（PBS）中。在可触知的肿瘤发展（肿瘤直径≥5mm）后，用腹膜内注射DMSO / PBS或NVP-BKM120（5μM/ kg /天）处理小鼠15天。每5天测量肿瘤大小，并在同一时间收集血液样品。通过测量肿瘤大小和检测循环的人κ链或λ链来评估肿瘤负荷。

[1]. Burger MT, et al. Identification of NVP-BKM120 as a Potent, Selective, Orally Bioavailable Class I PI3 Kinase Inhibitor for Treating Cancer. ACS Med Chem Lett. 2011 Aug 26;2(10):774-9. [2]. Zheng Y, et al. Novel phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor NVP-BKM120 induces apoptosis in myeloma cells and shows synergistic anti-myeloma activity with dexamethasone. J Mol Med (Berl). 2012 Jun;90(6):695-706.

C₁₈H₂₂ClF₃N₆O₂

446.854

446.144501

90.36000

2.67490